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发布时间：2022-06-17 16:44:51
单个TKgst突变体DI、LF、FI和LI 在大肠 BL菌株中表达并进行纯化。将TKgst突变体与型TKgst对(S)-羟基酮-的活性进行了比较（Chart ）。(S)-,,-trihydroxybutan--one (l-erythrulose，) 是型TK的非磷酸化底物之一，被选为对照。型和突变体对表现出的活性，除了DI，它是被脂肪链取代的极性残基。非极性残基Ile代替Asp显着降低酶的活性，可能是由于缺乏与的C的羟基的相互作用。脂肪链对其他非极性残基的突变对活性没有影响。
先前用α-羟基酮-测试的单位点突变体没有裂解 (±) -或 -羟基酮和的C-C 键。转向三重TKgst突变体文库（HLHXDX 或 LX，或 FX，或 LX 或 LX），将先前确定的位置结合起来进行逆向反应（使用脂肪族酮酸作为供体和脂肪醛作为受体形成α-羟基酮）。在大肠BL菌株中表达文库，使用粗提物针对α-羟基酮和进行筛选，并与型TKgst进行比较。根据产物或的斑点强度，通过薄层色谱法(TLC)估计每个文库中的阳性百分比。
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